KAPAHiFi高保真酶是经过基因工程改造的二代酶，区别于其他的高保真酶和高保真酶混合物，具有高效、快速、灵敏度高、扩增复杂模板等特点。KAPAHiFi在二代测序文库扩增方面，体现出高效、Bias少、覆盖度高、可扩增高GC/AT模板的特点，已经得到世界各大二代测序平台的广泛认可。
甲基化研究时，亚硫酸盐处理将未被甲基化的C转变成U，导致基因片段中存在U。高保真酶因为有修复错配的功能，所以扩增过程中遇到U时会将其认作错误碱基进行切断，导致反应无法继续进行。KAPAHiFi Uracil+是在KAPAHiFi的基础上进行了改造，使其在PCR反应过程中遇到U不会终止反应，保证反应的正常进行。1、主要应用
（1）二代测序中甲基化文库扩增；
（2）其他甲基化研究。
2、技术优势
（1）可扩增含U的基因片段；
（2）快速、高效；
（3）产物Bias少；
（4）可扩增高AT/GC模板；
（5）文库覆盖度高。
3、产品特点
（1）dUTP的存在对扩增无影响
上图：适时荧光PCR扩增含Uracil体系。dUTP对KAPA HiFiUracil+无抑制作用。用SYBR Green荧光定量PCR监测452bp基因的扩增情况，模板10倍梯度稀释（80pM-0.8fM），一组含有0.2mM的Dutp，另一组不含dUTP。扩增用的试剂分别为KAPAHiFi、KAPA HiFi Uracil+、安捷伦Pfu Turbo Cx。结果显示KAPAHiFi在dUTP存在的情况下，显著被抑制，而KAPA HiFi Uracil+则不受影响制。安捷伦Pfu TurboCx则完全被SYBR Green染料抑制，所以没有得到数据，无法呈现出来结果。
（2）高效扩增经过亚硫酸盐处理的人类全基因组文库
亚硫酸盐处理容易造成DNA损伤和降低DNA产物量。所以扩增时，因为抑制剂的存在、高A/T含量、DNA受损伤等因素叠加，导致了PCR产物量偏低、片段尺寸不合适、GCBias等。为了对比KAPA HiFi Uracil+与安捷伦的Pfu TurboCx，我们对比扩增亚硫酸盐处理之后的人类基因组文库，验证文库扩增产量和扩增Bias。用KAPA文库制备试剂盒制备片段长度为200-400bp的人类基因组文库，模板为5 g人类基因组DNA。亚硫酸盐处理之后，用KAPA文库定量试剂盒进行定量，发现约2.7%未转化基因组DNA残留。分别用KAPAHiFi Uracil+和安捷伦 Pfu Turbo Cx扩增未稀释的亚硫酸盐处理后基因组DNA，然后在Bioanalyzer2100上进行分析扩增产物，结果如下图所示。
上面3幅图所示：与安捷伦Pfu Turbo Cx相比，KAPA HiFiUracil+扩增的文库产量更高（图B），扩增批次间Bias更少（图C）。扩增循环数分别为12、14或16个，产物的分析采用Bioanalyzer2100（图A）。
（3）扩增高A/T真菌全基因组文库
上图：与安捷伦Pfu Turbo Cx相比，KAPA HiFiUracil+扩增产物量较高，片段尺寸相对较大。（Bioanalyzer 2100分析）。
如上两图所示：与安捷伦Pfu Turbo Cx相比，KAPA HiFiUracil+扩增甲基化文库优势明显，主要体现在覆盖深度以及扩增高AT/GC模板上。以上两图的结果为寄生虫基因组DNA经亚硫酸盐处理后，分别用安捷伦PfuTurbo Cx和KAPA HiFi Uracil+扩增后经Illumina GAIIx测序后的结果。
（4）进人类甲基化测序：USC Epigenome中心用KAPA HiFiUracil+评价人类基因组甲基化文库测序
KAPA HiFiUracil+提高了人类基因组DNA甲基化测序的质量，尤其AT/GC含量较高的情况。左图：分别用安捷伦Pfu TurboCx和KAPA HiFi Uracil+扩增100ng经过亚硫酸盐处理后DNA模板。
4、产品信息
